BBS1 Plasmide Double Nickase (h): sc-410535-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BBS1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BBS1 Double Nickase Plasmid (h) e il BBS1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BBS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BBS1 Antibody (F-1): sc-365138
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BBS1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410535-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BBS1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410535-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BBS1 codifica una subunità centrale del BBSome, un complesso multiproteico che coopera con il macchinario IFT per regolare il traffico delle proteine di membrana ciliare e la competenza di segnalazione delle ciglia primarie. Attraverso il controllo della localizzazione e del turnover dei recettori, BBS1 influenza vie dipendenti dalle ciglia, incluse la segnalazione Hedgehog e quella mediata dai GPCR, con effetti a valle sull’omeostasi cellulare, la regolazione neuroendocrina e lo sviluppo. L’alterazione di BBS1 compromette la ciliogenesi e lo smistamento del carico, portando a una trasduzione del segnale modificata e a difetti nella composizione ciliare. Le varianti di BBS1 nell’uomo sono fortemente associate alla sindrome di Bardet–Biedl e ad altre ciliopatie correlate, a supporto della sua ampia rilevanza nello studio dei meccanismi di malattia legati alle ciglia.
BBS1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BBS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BBS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BBS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BBS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.