Bag-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402929-ACT

BAG3 (Bag-3) è una co-chaperone inducibile dallo stress che si lega a HSP70/HSC70 per coordinare il controllo di qualità delle proteine, bilanciando proteostasi, autofagia e apoptosi nelle cellule umane. Supporta l’autofagia selettiva assistita da chaperoni e influenza l’organizzazione del citoscheletro, l’adesione cellulare e la meccanotrasduzione, in particolare in condizioni di stress proteotossico o ossidativo. Attraverso queste funzioni, BAG3 contribuisce alla regolazione delle vie di sopravvivenza cellulare e al turnover delle proteine danneggiate o inclini all’aggregazione. Un’espressione o una funzione deregolata di BAG3 è stata collegata a cardiomiopatie e disturbi neuromuscolari ed è spesso studiata nel contesto dell’adattamento delle cellule tumorali allo stress e della resistenza allo stress proteotossico.

Bag-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BAG3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Bag-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BAG3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BAG3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Bag-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BAG3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Bag-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Bag-3 nelle cellule tumorali con espressione di BAG3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.