Bag-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404540-ACT

BAG2 (Bag-2) codifica uma co-chaperona que se liga a Hsp70/Hsc70 e faz interface com o sistema ubiquitina–proteassoma para regular o dobramento, a triagem e a degradação de proteínas clientes. Ao modular a atividade de chaperonas e a proteostase, BAG2 influencia as respostas celulares ao estresse, o controle de qualidade proteica e a estabilidade de proteínas de sinalização em condições basais e de estresse. A expressão ou função desregulada de BAG2 tem sido associada a fenótipos de agregação proteica e a alterações na sinalização de sobrevivência implicadas na neurodegeneração e na biologia do câncer. Essas propriedades tornam BAG2 um nó útil para dissecar vias mediadas por chaperonas, estresse proteotóxico e mecanismos que moldam a homeostase proteica em células humanas.

Bag-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BAG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Bag-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BAG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BAG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Bag-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BAG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Bag-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Bag-2 em células tumorais com expressão de BAG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.