B7RP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406855

概要

ICOSLG は、誘導性 T 細胞共刺激分子のリガンド（B7RP-1）をコードしており、抗原提示細胞や間質系コンパートメントに発現する B7 ファミリーの免疫チェックポイント分子である。ICOSLG は活性化 T 細胞上の ICOS と結合し、この相互作用によって T 細胞の増殖・生存・サイトカイン産生プログラムを支える共刺激シグナルが促進される。その結果、胚中心反応、T 濾胞ヘルパー（Tfh）細胞への分化、クラススイッチを伴う抗体応答が形成される。ICOSLG–ICOS シグナルは PI3K-AKT 依存性経路と交差し、炎症組織や腫瘍微小環境において自然免疫細胞と獲得免疫細胞のクロストークを調節する。ICOSLG の発現やシグナル伝達の破綻は、自己免疫性炎症、アレルギー疾患、移植免疫、生体内での免疫回避機構などに関与するとされ、がんや慢性感染の研究においても重要視されている。

B7RP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるICOSLG遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ICOSLG内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ICOSLGのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、B7RP-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、B7RP-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ICOSLG欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• B7RP-1の機能に不可欠なICOSLGエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ICOSLGゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• B7RP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびB7RP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ICOSLG遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  B7RP-1 HDRプラスミド（h）および B7RP-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはICOSLGホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のICOSLG標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。