B7-H4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416865

Visão geral

VTCN1 codifica B7-H4 (inibidor 1 da ativação de células T contendo domínio V-set), um ligante de checkpoint imunitário da família B7 que suprime a proliferação de células T e a produção de citocinas, contribuindo para a regulação imunitária periférica. A B7-H4 é induzida em contextos mieloides e epiteliais e influencia a apresentação de antigénios, a sinalização inflamatória e programas de evasão imunitária no microambiente tumoral. A expressão desregulada de VTCN1 foi descrita em vários tumores sólidos e associa-se a uma menor atividade imunitária antitumoral, além de se cruzar com vias que governam a polarização de macrófagos e os limiares de ativação de células T. Estas características tornam VTCN1 um alvo útil para dissecar redes de co-sinalização inibitória e mecanismos imunorreguladores relevantes para modelos de cancro e inflamação crónica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO B7-H4 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene VTCN1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do VTCN1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do VTCN1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína B7-H4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de VTCN1 para a investigação da sinalização de B7-H4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) VTCN1 críticos para a função B7-H4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos VTCN1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo B7-H4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo B7-H4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus VTCN1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo B7-H4 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR B7-H4 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia VTCN1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo VTCN1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.