AWP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425748

Übersicht

Zfand6 kodiert AWP1, ein Zinkfingerprotein mit AN1-Typ-Domäne, das an der ubiquitinabhängigen Regulation des Proteinumsatzes und der zellulären Stresssignalgebung beteiligt ist. AWP1 wird mit der Modulation entzündlicher und angeborener Immunwege in Verbindung gebracht, einschließlich der NF-κB-Signalübertragung, unter anderem über Interaktionen mit ubiquitinierten Substraten und Komponenten von Ubiquitin-Ligase-Netzwerken. In Mausmodellen werden Expression und Funktion von Zfand6 im Kontext der Proteostase, der Signaltransduktion sowie zellulärer Antworten auf Zytokine und Stress untersucht. Eine Fehlregulation der ubiquitinvermittelten Kontrolle und der entzündlichen Signalgebung ist für Mechanismen relevant, die der Krebsbiologie, Neurodegeneration und immunvermittelten Pathologien zugrunde liegen, wodurch Zfand6 einen nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Signalwegen darstellt.

Das AWP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Zfand6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Zfand6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Zfand6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AWP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Zfand6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AWP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Zfand6-Exone abzielen, die für die AWP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Zfand6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AWP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AWP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Zfand6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AWP1 HDR-Plasmid (m) und AWP1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Zfand6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Zfand6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.