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ATP6V0E1慢病毒激活颗粒(h) | sc-411234-LAC | 200 µl | $455.00 |
ATP6V0E1 编码 V-ATPase 的 V0 区 E1 亚基,这是液泡型 H\+-ATPase 的核心组成部分,可将 ATP 水解与跨细胞内膜系统的质子转运偶联起来。ATP6V0E1 通过使内体、溶酶体和分泌囊泡酸化,支持受体介导的内吞作用、溶酶体水解酶活性、蛋白质周转与自噬,并参与高尔基体–内体网络中依赖 pH 的转运过程。V-ATPase 的功能还与营养感知和蛋白质稳态通路相互衔接,包括在溶酶体表面对 mTORC1 的调控,以及与细胞器酸碱平衡相关的应激反应。囊泡酸化失调及 V-ATPase 亚基异常与多种细胞表型相关,这些表型涉及神经退行性变、癌细胞代谢与侵袭,以及依赖内体/溶酶体加工的免疫信号传导。
ATP6V0E1 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 ATP6V0E1 表达。
ATP6V0E1 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在ATP6V0E1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性ATP6V0E1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 ATP6V0E1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。