ATF-6α Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-432646-LAC

O fator de transcrição ativador 6 (ATF-6α) é um sensor transmembrana residente no RE que, durante o estresse do retículo endoplasmático, é clivado e translocado para o núcleo, onde induz programas transcricionais que restauram a proteostase. Como um ramo central da resposta a proteínas mal dobradas (UPR), o ATF-6α coordena a expressão de chaperonas do RE, componentes da degradação associada ao RE (ERAD) e a remodelação da via secretória, integrando-se à sinalização de PERK e IRE1 para regular a sobrevivência e a adaptação celular. Em sistemas murinos, a modulação de Atf6 é usada para estudar a função de células secretoras, o manejo do estresse oxidativo e metabólico e a interconexão com a sinalização inflamatória. A desregulação da sinalização de ATF6 tem sido associada ao desequilíbrio de proteostase observado em modelos de neurodegeneração, estresse relacionado ao diabetes e remodelamento cardíaco, tornando-o um nó relevante para análises mecanísticas de vias.

As Partículas de Ativação Lentivirais ATF-6α (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Atf6 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ATF-6α (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Atf6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ATF-6α. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Atf6 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.