ATE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405539

概要

ATE1は、翻訳後にタンパク質のN末端へアルギニンを付加し、基質をユビキチン依存的なプロテアソーム分解へ導くデグロンを形成するN-end rule経路の中核酵素であるアルギニルトランスフェラーゼ1をコードします。タンパク質安定性の制御を通じて、ATE1はプロテオスタシス、細胞骨格の組織化、ストレス応答性シグナル伝達に影響し、アクチン関連タンパク質の調節を介した細胞遊走および接着の制御との関連も示されています。ATE1依存的なアルギニル化は、特定の制御因子の量を調整することで、ミトコンドリア機能や酸化ストレスへの適応にも寄与します。ATE1を含むN-end rule経路の構成要素の機能不全は、がん生物学、神経変性、ならびに実験系における発生表現型に関わる細胞恒常性の変化と関連しています。

ATE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるATE1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ATE1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ATE1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ATE1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ATE1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ATE1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ATE1の機能に不可欠なATE1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ATE1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ATE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびATE1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ATE1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ATE1 HDRプラスミド（h）および ATE1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはATE1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のATE1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。