Ataxin-7 Double Nickase Plasmid (h): sc-408149-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Ataxin-7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Ataxin-7 Double-Nickase-Plasmid (h) und Ataxin-7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATXN7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ataxin-7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408149-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ataxin-7 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408149-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATXN7 kodiert Ataxin-7, ein nukleäres Protein, das als integraler Bestandteil des Transkriptions-Koaktivator-Komplexes SAGA (STAGA) fungiert und Chromatin-Remodelling mit Histonacetylierung und Deubiquitinierung verknüpft. Über diese Aktivitäten trägt Ataxin-7 zur Regulation der RNA-Polymerase-II-abhängigen Transkription, der Promotorzugänglichkeit und von Genexpressionsprogrammen bei, die für die neuronale und retinale Homöostase wichtig sind. Eine Polyglutamin-Expansion in ATXN7 beeinträchtigt die Integrität des SAGA-Komplexes und die Transkriptionsregulation und ist mit der spinozerebellären Ataxie Typ 7 (SCA7) assoziiert, einer neurodegenerativen Erkrankung mit ausgeprägter retinaler Beteiligung. Die experimentelle Modulation von ATXN7 unterstützt Studien zur chromatinvermittelten Transkription, Proteostase und zu stressresponsiven Gennetzwerken in humanen Zellmodellen.
Ataxin-7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATXN7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATXN7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATXN7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATXN7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.