ASK 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400658-ACT

MAP3K5 codifica a quinase 1 reguladora de sinal de apoptose (ASK1), uma MAP3K responsiva ao estresse que integra estresse oxidativo, estresse do retículo endoplasmático, fluxos de cálcio e sinais inflamatórios para propagar a sinalização por meio das cascatas de MAPK JNK e p38. A atividade da ASK1 é regulada por interações dependentes de redox com a tiorredoxina e outras proteínas de ancoragem/adaptadoras, acoplando a detecção de estresse a montante à fosforilação de MAP2Ks a jusante e a programas transcricionais que moldam a apoptose, a produção de citocinas e as respostas imunes inatas. A desregulação da sinalização de ASK1 tem sido implicada em contextos de lesão celular relevantes para a neurodegeneração, o estresse cardiometabólico e a inflamação crônica, nos quais alterações na saída das MAPKs podem influenciar a sobrevivência, o remodelamento e a expressão de genes inflamatórios. Como a ASK1 ocupa um nó-chave conectando entradas de estresse a vias efetoras de MAPK, ela é frequentemente estudada por seu papel na reorganização de redes de sinalização e em decisões de destino celular dependentes do contexto.

ASK 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP3K5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ASK 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP3K5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP3K5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ASK 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP3K5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ASK 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ASK 1 em células tumorais com expressão de MAP3K5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.