ARID1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402365-ACT

ARID1B codifica a proteína 1B contendo domínio de interação rico em AT, uma subunidade essencial do complexo SWI/SNF (BAF) de remodelamento de cromatina dependente de ATP, que regula o posicionamento de nucleossomos e programas transcricionais durante o desenvolvimento e a diferenciação. Ao coordenar a acessibilidade de enhancers e o remodelamento de promotores, ARID1B influencia a especificação de linhagens, o controle do ciclo celular e a expressão de genes responsivos a danos no DNA em múltiplos contextos de sinalização. Alterações na função de ARID1B têm sido implicadas em transtornos do neurodesenvolvimento e em diversos cânceres, nos quais a regulação da cromatina comprometida contribui para estados transcricionais aberrantes e perda da identidade celular. Essas propriedades fazem de ARID1B um alvo amplamente estudado na regulação epigenética, no controle transcricional e no mapeamento de genótipo para fenótipo.

ARID1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARID1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARID1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARID1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARID1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARID1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARID1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARID1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARID1B em células tumorais com expressão de ARID1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.