ARHGAP4 Plasmide Double Nickase (h): sc-407621-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ARHGAP4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ARHGAP4 Double Nickase Plasmid (h) e il ARHGAP4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARHGAP4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ARHGAP4 Antibody (G-6): sc-376251
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ARHGAP4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407621-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARHGAP4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407621-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARHGAP4 codifica una proteina attivatrice della GTPasi (GAP) per le GTPasi della famiglia Rho, che accelera l’idrolisi del GTP sulle Rho GTPasi, plasmando la dinamica del citoscheletro di actina, le protrusioni di membrana e la polarità cellulare. Attraverso la modulazione della segnalazione RhoA/Rac1/Cdc42, ARHGAP4 influenza la segnalazione dipendente dall’adesione, la crescita dei neuriti e la migrazione direzionale in contesti ematopoietici e neurali. Una segnalazione delle Rho GTPasi deregolata è ampiamente implicata in alterazioni della motilità cellulare, della funzione delle cellule immunitarie e di fenotipi invasivi, rendendo ARHGAP4 un nodo utile per studi meccanicistici sul rimodellamento del citoscheletro. La perturbazione di ARHGAP4 è quindi rilevante per indagare vie che accoppiano l’organizzazione dell’actina a output di segnalazione e a programmi trascrizionali in stati cellulari associati a malattia.
ARHGAP4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARHGAP4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARHGAP4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARHGAP4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARHGAP4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.