Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
ARH3 Plasmide Double Nickase (m): sc-430308-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ARH3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ARH3 Double Nickase Plasmid (m) e il ARH3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Adprhl2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ARH3 Antibody (A-7): sc-374162
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ARH3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430308-NIC | 20 µg | $410.00 |
Adprhl2 codifica ARH3, una mono-ADP-ribosilidrolasi che rimuove l’ADP-ribosilazione legata alla serina e i metaboliti correlati del poli(ADP-ribosio) generati durante la segnalazione del danno al DNA. Eliminando l’ADP-ribosio dalle proteine modificate, ARH3 contribuisce a modulare le risposte dipendenti da PARP, mantiene l’omeostasi di NAD⁺/ADP-ribosio e sostiene la stabilità del genoma in condizioni di stress replicativo e ossidativo. Nelle cellule di topo, la funzione di ARH3 interseca la regolazione della cromatina e le vie di risposta allo stress che influenzano la sopravvivenza cellulare e la segnalazione legata all’infiammazione. La disregolazione del turnover dell’ADP-ribosilazione è associata a fenotipi neurodegenerativi e a una maggiore sensibilità allo stress genotossico, rendendo Adprhl2 un nodo utile per studi meccanicistici sulla riparazione del DNA e sulla resilienza cellulare.
ARH3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Adprhl2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Adprhl2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Adprhl2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Adprhl2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.