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ARG1/Arginase 1CRISPR激活质粒(h) | sc-418076-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 ARG1 基因编码精氨酸酶 1(arginase 1),这是一种位于胞质中的金属酶,催化 L-精氨酸转化为 L-鸟氨酸和尿素,是尿素循环的终末步骤,并在氮代谢废物清除中起关键调控作用。通过控制细胞内精氨酸的可用性,ARG1 可经由鸟氨酸通量影响多胺与脯氨酸的生物合成,并可通过与一氧化氮合酶竞争底物而间接调节一氧化氮的合成。ARG1 活性与肝细胞的代谢稳态密切相关,也与髓系细胞的免疫代谢程序相联系:精氨酸耗竭可塑造 T 细胞反应性及炎症信号传导。ARG1 表达或功能失调与氨解毒障碍相关,并被认为参与肿瘤相关髓系细胞生物学等精氨酸代谢发生重塑的多种情境。
ARG1/Arginase 1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ARG1的表达。
ARG1/Arginase 1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ARG1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ARG1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ARG1/Arginase 1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ARG1位点,并能够研究内源性位点上依赖于ARG1/Arginase 1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ARG1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ARG1/Arginase 1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。