ARFGAP1 Double Nickaseプラスミド (h2): sc-403939-NIC-2
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ARFGAP1 Double Nickaseプラスミド (h2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ARFGAP1ダブルニカースプラスミド（h2）およびARFGAP1ダブルニカースプラスミド（h22）は、ARFGAP1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ARFGAP1 抗体 (C-4): sc-271303
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ARFGAP1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403939-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのARFGAP1は、ADPリボシル化因子（ARF）ファミリーの低分子GTPアーゼにおけるGTP加水分解を促進するGTPアーゼ活性化タンパク質1（ARF GTPase-activating protein 1）をコードしており、ゴルジ体に関連する調節因子として小胞の出芽やコート形成・解離のダイナミクスを協調的に制御する。COPI依存性の逆行性輸送やエンドソーム—ゴルジ間輸送を調節することで、ARFGAP1は膜の曲率形成、カーゴ選別、ゴルジ体構築の維持に寄与し、ARFシグナル伝達を分泌・リサイクリング経路といったより広範な細胞内輸送ネットワークへと結び付ける。ARFGAP1を介した輸送の破綻は、タンパク質恒常性やオルガネラ輸送が乱れる状況で検討されており、小胞輸送やタンパク質処理に関わる神経変性関連の機構を含む文脈でも研究対象となっている。ARFGAP1の遺伝子編集は、ヒト細胞系におけるノックアウト／ノックインモデル、相互作用マッピング、輸送アッセイなどを用いて、ARF経路の制御機構、小胞生合成、ゴルジ機能の解明を可能にする。
ARFGAP1 ダブルニカースプラスミド（h2）は、human 細胞株における ARFGAP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ARFGAP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ARFGAP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ARFGAP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。