ARF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400799

概要

ADPリボシル化因子6（ARF6）は小型GTPアーゼであり、エンドサイトーシス、リサイクリング、そしてアクチン細胞骨格のリモデリングを制御することで、形質膜のダイナミクスを調節します。ARF6はGDP結合型とGTP結合型を行き来することで、インテグリン、カドヘリン、受容体型チロシンキナーゼの輸送を統括し、細胞極性、遊走、サイトカイネシスに影響を与えます。ARF6依存的なシグナル伝達はPI3K/AKT、MAPK、RhoファミリーGTPアーゼ経路と交差し、膜突起形成や小胞輸送を形作ります。ARF6活性の異常な制御は、がんモデルにおける浸潤性表現型や受容体輸送の変化、さらに疾患関連の文脈における神経細胞および免疫細胞機能の異常と関連づけられています。

ARF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるARF6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ARF6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ARF6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ARF6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ARF6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ARF6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ARF6の機能に不可欠なARF6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ARF6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ARF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびARF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ARF6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ARF6 HDRプラスミド（h）および ARF6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはARF6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のARF6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。