Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
ARF6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400799
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ARF6 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ARF6, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ARF6 Anticuerpo (3A-1): sc-7971
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ARF6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400799 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El factor de ribosilación de ADP 6 (ARF6) es una pequeña GTPasa que regula la dinámica de la membrana plasmática al controlar la endocitosis, el reciclaje y la remodelación del citoesqueleto de actina. Mediante el ciclo entre los estados unidos a GDP y a GTP, ARF6 coordina el tráfico de integrinas, cadherinas y receptores tirosina quinasa, influyendo en la polaridad celular, la migración y la citocinesis. La señalización dependiente de ARF6 se cruza con las vías de PI3K/AKT, MAPK y las GTPasas de la familia Rho para moldear la protrusión de la membrana y el transporte vesicular. La actividad desregulada de ARF6 se ha vinculado a fenotipos invasivos y a un tráfico receptor alterado en modelos de cáncer, así como a una función anómala de neuronas y células inmunitarias en contextos relevantes para diversas enfermedades.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ARF6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ARF6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ARF6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ARF6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ARF6.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ARF6 para la investigación de la señalización de ARF6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de ARF6 críticos para la función de ARF6
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ARF6 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ARF6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ARF6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ARF6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ARF6 (h) y el plásmido HDR ARF6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ARF6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ARF6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.