ARF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419189

概要

Arf4は、ゴルジ体およびエンドソーム系における膜輸送と脂質リモデリングを制御するARFファミリーの小型GTPアーゼであるADPリボシル化因子4（ARF4）をコードします。ARF4はGDP結合型とGTP結合型の間を循環し、小胞の出芽、カーゴの選別、受容体輸送を協調的に制御します。これには、分泌経路の輸送や繊毛へのターゲティングを制御する経路も含まれます。被覆タンパク質／アダプター複合体やホスホイノシチド代謝との相互作用を介して、ARF4は細胞小器官の構築維持と極性をもった膜供給に寄与します。ARF4依存性輸送の異常は、受容体シグナル伝達の変化、繊毛形成（ciliogenesis）の欠陥、細胞ストレス応答などに関与するとされ、神経生物学、上皮の恒常性、腫瘍関連表現型に関連する可能性が示唆されています。

ARF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるArf4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Arf4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Arf4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ARF4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ARF4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Arf4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ARF4の機能に不可欠なArf4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Arf4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ARF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびARF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Arf4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ARF4 HDRプラスミド（m）および ARF4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはArf4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のArf4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。