Aquaporin 9/AQP9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401298-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Aquaporin 9/AQP9 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Aquaporin 9/AQP9ダブルニカースプラスミド（h）およびAquaporin 9/AQP9ダブルニカースプラスミド（h2）は、AQP9を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Aquaporin 9/AQP9 抗体 (G-3): sc-74409
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Aquaporin 9/AQP9 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401298-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aquaporin 9/AQP9 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401298-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AQP9はアクアポリン9をコードしており、アクアポリン9は細胞膜に存在するチャネルとして、水や小さな中性溶質（グリセロールやその他のポリオールを含む）の膜横断的な移動を促進し、浸透圧バランスと中間代謝を結び付けます。肝細胞や免疫細胞では、AQP9がグリセロールの取り込みや炭素源の取り扱いに関与し、糖新生や脂質代謝過程に影響を与え得るほか、細胞容積の調節にも関与します。その発現は炎症性および代謝性のシグナルによって制御され、栄養輸送、ストレス応答、細胞状態の遷移を司る経路とAQP9を結び付けています。AQP9の発現レベルの異常は、代謝機能障害や炎症性疾患の生物学的文脈で報告されており、膜輸送や代謝リプログラミングの機序研究における有用な標的となります。
Aquaporin 9/AQP9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AQP9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AQP9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AQP9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AQP9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。