Aquaporin 4/AQP4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400258-ACT

AQP4 codifica a aquaporina-4, o principal canal de água nos pés terminais dos astrócitos e noutras membranas polarizadas, onde medeia um fluxo de água rápido e bidirecional através da membrana plasmática. Ao acoplar o movimento osmótico de água ao tamponamento de K+ e à dinâmica de fluidos perivascular, a AQP4 contribui para a homeostase hídrica cerebral, a depuração glinfática e a regulação do volume do espaço extracelular. A sua localização nos domínios perivascular e subpial, via complexos associados à distrofina, liga a AQP4 ao arcabouço (scaffolding) da membrana e às interações astrócito–neurovasculares. Alterações na expressão da AQP4 ou na sua localização incorreta são estudadas em contextos de edema cerebral, disfunção da barreira hematoencefálica, neuroinflamação e mecanismos de doenças desmielinizantes.

Aquaporin 4/AQP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AQP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Aquaporin 4/AQP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AQP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AQP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Aquaporin 4/AQP4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AQP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Aquaporin 4/AQP4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Aquaporin 4/AQP4 em células tumorais com expressão de AQP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.