Aquaporin 1/AQP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400340-NIC

AQP1（アクアポリン1）は四量体を形成する膜チャネルで、細胞膜を介した迅速かつ選択的な水輸送を担い、浸透圧バランスや細胞容積の維持に寄与します。ヒト組織では、赤血球、腎近位尿細管および下行薄脚、脈絡叢、ならびに微小血管内皮で高発現しており、上皮を介した体液移動や微小血管透過性などの過程を支えています。AQP1依存的な水フラックスは、浸透圧ストレスや機械的刺激に対する応答とも交差し、細胞運動性や組織の体液恒常性の形成に関与します。AQP1発現の変化は、体液処理の破綻や浮腫に関連する表現型と結び付けられており、腎生理、血管新生、腫瘍関連微小環境のリモデリングなどの文脈で頻繁に研究されています。

Aquaporin 1/AQP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AQP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AQP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AQP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AQP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。