AQP11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403957-ACT

O AQP11 humano codifica a aquaporina-11, um membro atípico da família das aquaporinas que se localiza predominantemente em membranas intracelulares e contribui para a homeostase celular de água e de pequenos solutos. A atividade do AQP11 está associada à manutenção da integridade do retículo endoplasmático, à regulação do equilíbrio osmótico e a vias de proteostase que influenciam as respostas celulares ao estresse e a função de organelas. No rim e em outros tecidos secretórios ou metabolicamente ativos, alterações na expressão de AQP11 têm sido associadas à desregulação da homeostase de células tubulares e ao aumento da suscetibilidade a fenótipos de lesão relacionados ao estresse. Essas propriedades tornam o AQP11 um alvo útil para investigar o transporte de membrana, processos associados ao RE e funções dependentes do contexto na fisiologia celular relevante para doenças.

AQP11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AQP11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AQP11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AQP11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AQP11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AQP11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AQP11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AQP11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AQP11 em células tumorais com expressão de AQP11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.