apoA-IV Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402217-ACT

O APOA4 humano codifica a apolipoproteína A-IV (apoA-IV), uma apolipoproteína secretada sintetizada principalmente por enterócitos intestinais e associada a quilomícrons e HDL na circulação. A apoA-IV contribui para a absorção de lipídios e para o metabolismo pós-prandial de lipoproteínas, apoiando o efluxo de colesterol e modulando enzimas envolvidas no remodelamento de lipoproteínas nas vias de transporte reverso de colesterol. Por seus papéis no processamento intestinal de lipídios e na homeostase lipídica sistêmica, o APOA4 é estudado no contexto de dislipidemia, biologia relacionada à aterosclerose e mecanismos de doenças metabólicas. Sua dinâmica de expressão também o torna um marcador útil para programas transcricionais responsivos a nutrientes em sistemas modelo gastrointestinais e hepáticos.

apoA-IV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APOA4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

apoA-IV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APOA4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APOA4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de apoA-IV. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APOA4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de apoA-IV no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via apoA-IV em células tumorais com expressão de APOA4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.