APC7 Double Nickaseプラスミド (m): sc-425084-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- APC7 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- APC7ダブルニカースプラスミド（m）およびAPC7ダブルニカースプラスミド（m2）は、Anapc7を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: APC7 抗体 (A-6): sc-365649
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
APC7 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-425084-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APC7 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-425084-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのAnapc7は、後期促進複合体／サイクロソーム（APC/C）を構成する主要なテトラトリコペプチドリピート（TPR）サブユニットであるAPC7をコードする。APC/CはE3ユビキチンリガーゼとして、重要な細胞周期制御因子をプロテアソーム分解へと標的化することで、有糸分裂およびG1期の適切な進行を駆動する。APC7はAPC/Cの複合体形成とコアクチベーターとの相互作用を支え、紡錘体組立チェックポイント、後期開始、有糸分裂終期における基質認識の協調に関与する。APC/C機能の破綻は、染色分体分離やチェックポイントの忠実性を損ない、ゲノム維持を不安定化させ得るため、APC/Cサブユニットは増殖組織における異数性関連の表現型と結び付けられている。したがってAnapc7は、マウスモデルにおいてユビキチン依存性タンパク質分解、染色体分配、細胞周期制御を司る経路の研究で頻繁に扱われる。
APC7 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Anapc7 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Anapc7内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Anapc7の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Anapc7が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。