ANT Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400679-ACT

O SLC25A4 humano codifica a translocase de nucleotídeos de adenina (ANT), um transportador da membrana interna mitocondrial que realiza a troca de ADP e ATP entre a matriz e o citosol para sustentar a fosforilação oxidativa e a homeostase energética celular. Ao acoplar o transporte de nucleotídeos ao potencial de membrana mitocondrial, a ANT ajuda a coordenar a atividade da cadeia respiratória, o fluxo metabólico e respostas ao estresse ligadas à transição de permeabilidade mitocondrial. A desregulação da atividade da ANT tem sido associada a fenótipos de disfunção mitocondrial que afetam tecidos de alta demanda energética, incluindo contextos neuromusculares e cardiometabólicos, tornando o SLC25A4 um ponto útil para o estudo da bioenergética e do controle de qualidade mitocondrial. Este gene é frequentemente investigado em vias relacionadas ao equilíbrio ATP/ADP, à sinalização mitocondrial associada à apoptose e a respostas adaptativas ao estresse energético.

ANT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC25A4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ANT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC25A4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC25A4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ANT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC25A4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ANT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ANT1 em células tumorais com expressão de SLC25A4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.