Annexin-2/ANXA2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400296-ACT

Das humane Gen **ANXA2** kodiert Annexin A2, ein Ca²⁺-abhängiges Phospholipid-bindendes Protein, das sich mit **S100A10** zu einem Komplex zusammenschließt und dadurch Membranorganisation, Endozytose und die Dynamik des Aktinzytoskeletts reguliert. Annexin A2 koordiniert an der Zelloberfläche die Plasminbildung und fibrinolytische Aktivität und beeinflusst damit den Umbau der extrazellulären Matrix, Zellmigration und angiogene Prozesse. Es ist an Vesikeltransport und Signalereignissen beteiligt, die mit Entzündungsreaktionen und oxidativem Stress verknüpft sind, und kann die Plasminogenaktivierung sowie die Lokalisation von Proteasen modulieren. Eine fehlregulierte Expression oder Fehlverteilung von ANXA2 wurde bei zahlreichen Krebsarten sowie bei vaskulären und entzündlichen Pathologien beschrieben, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zu Invasion, metastaseassoziierten Programmen und thrombosebezogener Biologie stützt.

Annexin-2/ANXA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ANXA2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Annexin-2/ANXA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ANXA2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ANXA2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Annexin-2/ANXA2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ANXA2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Annexin-2/ANXA2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Annexin-2/ANXA2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ANXA2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.