AMPK alpha 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400277-ACT

PRKAA2 codifica a subunidade catalítica α2 da proteína quinase ativada por AMP (AMPK), um sensor central de energia que mantém a homeostase de ATP celular em resposta ao estresse metabólico. A AMPKα2 integra sinais a montante de LKB1 e CaMKK2 para regular a captação de glicose, a oxidação de lipídios, a biogênese mitocondrial e a autofagia por meio de vias que incluem a inibição de mTORC1 e a ativação de ULK1. Em tecidos humanos, a atividade da AMPKα2 está intimamente ligada ao sensoriamento de nutrientes e ao equilíbrio redox, com ampla relevância para a desregulação metabólica, a inflamação e fenótipos de adaptação ao estresse observados em contextos cardiometabólicos e associados à neurodegeneração. Modular a expressão de PRKAA2 é, portanto, útil para dissecar como a sinalização de estresse energético remodela programas transcricionais e decisões de destino celular.

AMPK alpha 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRKAA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AMPK alpha 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRKAA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRKAA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AMPK alpha 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRKAA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AMPK alpha 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AMPK alpha 2 em células tumorais com expressão de PRKAA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.