AMPK alpha 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400104-ACT

PRKAA1 codifica a AMPK alfa 1, a subunidade catalítica do complexo da proteína quinase ativada por AMP (AMPK), que detecta o estado energético celular e coordena respostas metabólicas adaptativas. Após a ativação, a AMPK modula a captação de glicose, a oxidação de ácidos graxos, a biogênese mitocondrial e a autofagia, ao mesmo tempo em que restringe vias anabólicas, em parte por meio de interações cruzadas com o mTORC1 e da regulação de programas transcricionais. A AMPK alfa 1 integra sinais de quinases a montante, como LKB1 e CaMKK2, para controlar o crescimento celular, o equilíbrio redox e a sobrevivência ao estresse. A desregulação da sinalização de AMPK tem sido implicada em distúrbios metabólicos, na reprogramação metabólica de células cancerosas e em fenótipos inflamatórios, tornando PRKAA1 um alvo útil para investigações em nível de via.

AMPK alpha 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRKAA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AMPK alpha 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRKAA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRKAA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AMPK alpha 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRKAA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AMPK alpha 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AMPK alpha 1 em células tumorais com expressão de PRKAA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.