ALX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419095

概要

Alx4 は、ALX4 ホメオボックス転写因子をコードしており、頭蓋顔面のパターニング、四肢および骨格の形態形成、ならびに間葉系分化を形作る発生遺伝子発現プログラムを制御する核内調節因子です。ALX4 は、細胞増殖や位置情報（ポジショナル・アイデンティティ）を制御する転写ネットワークに影響し、骨芽細胞系譜へのコミットメントや組織境界の形成に関与する経路とも交差します。マウスモデルでは、Alx4 機能の変化が頭蓋冠の発生異常、頭蓋顔面奇形、指（趾）のパターン形成異常と関連しており、先天的な形態形成を研究するための結節点としての有用性が示されています。これらの特性から、ALX4 は骨格発生および関連する発生表現型の基盤となる遺伝子制御回路を解明するうえで重要な標的となります。

ALX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAlx4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Alx4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Alx4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ALX4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ALX4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Alx4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ALX4の機能に不可欠なAlx4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Alx4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ALX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびALX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Alx4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ALX4 HDRプラスミド（m）および ALX4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAlx4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAlx4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。