ALR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403367
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- ALR Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im ALR-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ALR: sc-365885
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ALR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-403367 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das humane Gen **GFER** kodiert den „Augmenter of Liver Regeneration“ (**ALR**), eine **FAD‑abhängige Sulfhydryloxidase**, die vorwiegend im **Intermembranraum der Mitochondrien** lokalisiert ist und **oxidative Proteinfaltung** sowie die **Mitochondrienbiogenese** unterstützt. ALR wirkt innerhalb des **MIA40/ERV1‑(CHCHD4/GFER-)Disulfid-Relay-Systems**, um **cysteinreiche Proteine** zu importieren und zu maturieren, und beeinflusst dadurch die **Integrität der Atmungskette**, die **Redoxhomöostase** und **zelluläre Überlebensprogramme**. Über diese Funktionen beeinflusst ALR Prozesse wie **Energiestoffwechsel**, den **Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies** und **Stressantworten**, die bei metabolischen Dysfunktionen und tumorassoziiertem mitochondrialem Remodeling häufig verändert sind. Eine Dysregulation von **GFER/ALR** wurde mit **Phänotypen mitochondrialer Erkrankungen** sowie mit weiter gefasster Pathologie in Verbindung gebracht, die auf **gestörten Proteinimport** und eine eingeschränkte **Kapazität zur oxidativen Proteinfaltung** zurückzuführen ist.
Das ALR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GFER-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GFER-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GFER nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ALR-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GFER-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ALR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf GFER-Exone abzielen, die für die ALR-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere GFER-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom ALR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ALR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GFER-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ALR HDR-Plasmid (h) und ALR HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GFER-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GFER-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.