alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401939

概要

ATP1A2は、Na⁺/K⁺-ATPaseのα2触媒サブユニットをコードする。この酵素は細胞膜に存在するP型ATPaseであり、ATP加水分解をイオン輸送に結び付けることで、細胞内のNa⁺およびK⁺濃度勾配を維持する。この電気化学的勾配は、膜電位、浸透圧バランス、二次性能動輸送を支えるほか、Na⁺/Ca²⁺交換を介したCa²⁺恒常性にも寄与し、その結果、電気的に活動性の高い組織における興奮性やシグナル伝達に影響を与える。ATP1A2の活性は、神経細胞およびグリア細胞におけるイオンの緩衝、シナプス伝達、ならびにイオン不均衡に対する細胞ストレス応答を制御する経路とも交差している。ATP1A2の遺伝学的・機能的な攪乱は、家族性片麻痺性片頭痛や関連する発作／運動失調の症状を含む神経学的表現型と関連しており、興奮性障害の機序研究において重要な標的となる。

alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるATP1A2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ATP1A2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ATP1A2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ATP1A2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2の機能に不可欠なATP1A2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ATP1A2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびalpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ATP1A2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 HDRプラスミド（h）および alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはATP1A2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のATP1A2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。