alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401939-ACT

ATP1A2 は、Na⁺/K⁺-ATPase の α2 触媒サブユニットをコードします。Na⁺/K⁺-ATPase は細胞膜に存在する P 型 ATPase で、ATP を加水分解することで細胞内の Na⁺ と細胞外の K⁺ を交換し、膜電位とイオン恒常性に必須の電気化学的勾配を維持します。この活性は、神経細胞の興奮性、アストロサイトによる K⁺ バッファリング、ならびに Ca²⁺ 動態、細胞容積調節、代謝需要に影響する二次輸送過程との結合を支える、イオン輸送の基盤となります。ATP1A2 の機能は、活動電位回復や神経伝達物質の取り込みを規定するイオン勾配への影響を介して、シナプス伝達や興奮性シグナルを制御する経路とも交差します。ATP1A2 の遺伝学的な破綻や調節異常は、家族性片麻痺性片頭痛2型や発作感受性を含む神経学的表現型と関連しており、興奮性およびグリア—ニューロン相互作用の機序研究における重要な対象となります。

alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATP1A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATP1A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATP1A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATP1A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるalpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATP1A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるalpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。