alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400239-ACT

ATP1A1 kodiert die katalytische Alpha-1-Untereinheit der Na⁺/K⁺-ATPase, einer P-Typ-ATPase, die elektrochemische Gradienten aufrechterhält, indem sie Na⁺ exportiert und K⁺ in einem ATP-abhängigen Zyklus importiert. Diese Pumpe ist zentral für das Membranpotenzial, die Regulation des Zellvolumens und den sekundär aktiven Transport und beeinflusst damit Nährstoffaufnahme, Erregbarkeit und den epithelialen Ionenhaushalt. ATP1A1 ist außerdem an Signal-Mikrodomänen beteiligt, die mit der Aktivität von Src-Familien-Kinasen und nachgeschalteten Signalwegen zusammentreffen, welche Proliferation und Stressantworten beeinflussen. Eine dysregulierte Funktion der Na⁺/K⁺-ATPase wurde mit veränderter Ionenhomöostase und Signalübertragung in kardiovaskulären, neurologischen und nierenassoziierten Pathomechanismen in Verbindung gebracht, was ATP1A1 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Untersuchungen in menschlichen Zellen macht.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ATP1A1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ATP1A1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ATP1A1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ATP1A1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ATP1A1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.