ALMS1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407355-ACT

ALMS1 kodiert ein großes, mit dem Zentrosom und dem Basalkörper assoziiertes Protein, das an primären Zilien lokalisiert ist und für die Ziliogenese, den ziliären Transport sowie die Aufrechterhaltung der Mikrotubuli-Organisation erforderlich ist. Über seine Rolle in der zilienabhängigen Signalübertragung beeinflusst ALMS1 Signalwege wie Hedgehog und andere sensorische Transduktionsprogramme, die Zellzykluskontrolle, Polarität und Gewebehomöostase koordinieren. Eine Störung der ALMS1-Funktion wird mit Ziliopathie-Phänotypen in Verbindung gebracht, einschließlich des Alström-Syndroms, und wird häufig im Kontext metabolischer Dysregulation, retinaler Degeneration, Kardiomyopathie und Nierenfunktionsstörungen untersucht. Die Modulation der ALMS1-Expression ist daher hilfreich, um die Zilienbiologie, den intrazellulären Transport und Signalnetzwerke zu analysieren, die multisystemischen Krankheitsmechanismen zugrunde liegen.

ALMS1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ALMS1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ALMS1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ALMS1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ALMS1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ALMS1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ALMS1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ALMS1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ALMS1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ALMS1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.