ALKBH6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407122

Visão geral

ALKBH6 codifica um membro da família AlkB de dioxigenases dependentes de Fe(II)/2-oxoglutarato, um grupo de proteínas mais conhecido por reações de desmetilação oxidativa em ácidos nucleicos e metabólitos relacionados. Embora a ALKBH6 permaneça menos bem caracterizada do que outros parálogos de ALKBH, ela é estudada no contexto das respostas celulares ao estresse por alquilação, da manutenção da integridade do genoma e da regulação de processos ligados a modificações de ácidos nucleicos. A desregulação de componentes da via AlkB é frequentemente investigada por possíveis relações com carga mutacional, estresse de replicação e alterações no panorama de modificações de RNA/DNA em câncer e em outras condições associadas à instabilidade genômica. Modelos de perturbação de ALKBH6 sustentam estudos mecanísticos de sinalização da resposta a danos no DNA, escolha de vias de reparo e consequências transcricionais ou epitranscritômicas a jusante.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ALKBH6 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ALKBH6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ALKBH6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ALKBH6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ALKBH6.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ALKBH6 para a investigação da sinalização de ALKBH6, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ALKBH6 críticos para a função ALKBH6
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ALKBH6 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ALKBH6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ALKBH6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ALKBH6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ALKBH6 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ALKBH6 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ALKBH6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ALKBH6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.