Akt1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-419071-LAC

O Akt1 de camundongo codifica uma quinase de serina/treonina que atua como um efetor central da sinalização de PI3K, integrando sinais de fatores de crescimento e nutrientes para regular a sobrevivência celular, a proliferação, o metabolismo e a síntese proteica. A AKT1 fosforila alvos a jusante, incluindo GSK3, fatores de transcrição FOXO e TSC2, para modular a atividade do mTORC1, o metabolismo do glicogênio e a resistência à apoptose. Em pesquisa biomédica, alterações na sinalização de Akt1 são amplamente associadas à desregulação da sinalização de insulina/IGF, ao controle aberrante do ciclo celular e a vias de resposta ao estresse que contribuem para fenótipos relevantes para doenças. Pela conectividade de sua via, Akt1 é um nó frequentemente estudado para mapear o crosstalk de sinalização e as consequências funcionais da reprogramação de vias em modelos celulares.

As Partículas de Ativação Lentivirais Akt1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Akt1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Akt1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Akt1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Akt1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Akt1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.