Particules Lentivirales d'Activation (m) Akt1: sc-419071-LAC

Le gène murin **Akt1** code une kinase sérine/thréonine qui agit comme effecteur central de la signalisation PI3K, en intégrant des signaux provenant des facteurs de croissance et des nutriments afin de réguler la survie cellulaire, la prolifération, le métabolisme et la synthèse protéique. AKT1 phosphoryle des cibles en aval, notamment GSK3, les facteurs de transcription FOXO et TSC2, pour moduler l’activité de mTORC1, le métabolisme du glycogène et la résistance à l’apoptose. En recherche biomédicale, des altérations de la signalisation d’Akt1 sont largement associées à une dérégulation des voies de l’insuline/IGF, à un contrôle anormal du cycle cellulaire et à des voies de réponse au stress contribuant à des phénotypes pertinents pour les maladies. La connectivité de cette voie fait d’Akt1 un nœud fréquemment étudié pour cartographier les interactions (crosstalk) entre voies de signalisation et les conséquences fonctionnelles du remodelage des réseaux de signalisation dans des modèles cellulaires.

Les particules d'activation lentivirales Akt1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Akt1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Akt1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Akt1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Akt1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Akt1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.