AKAP 2 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-419065-ACT-2

マウスのAkap2はAキナーゼアンカリングタンパク質2（AKAP2）をコードしており、これはプロテインキナーゼA（PKA）および関連するシグナル伝達成分を空間的に配置して、区画特異的なcAMP応答をもたらす足場タンパク質である。AKAP2はPKAを特定の細胞内部位へリクルートすることで、cAMPシグナル下流の転写プログラムを状況依存的に制御するとともに、細胞骨格動態、細胞極性、膜輸送を調節するリン酸化ネットワークに影響を与える。AKAPにより固定化されたPKAマイクロドメインの破綻や制御異常は、発生シグナル伝達、ニューロンや心筋細胞の興奮性、さらには疾患関連表現型に関与するシグナル制御破綻の広範な機構の研究において重要である。Akap2の遺伝子編集および機能ゲノミクスのワークフローにより、PKAの区画化の検証、タンパク質間相互作用界面のマッピング、ならびにマウスモデルや改変細胞システムにおける経路依存的な細胞表現型の読み出しの妥当性確認が可能となる。

AKAP 2 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Akap2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AKAP 2 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Akap2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAkap2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AKAP 2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAkap2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAKAP 2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAkap2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAKAP 2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。