AK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419062

概要

Ak1はアデニル酸キナーゼ1（AK1）をコードする遺伝子であり、細胞質に存在するリン酸基転移酵素として、ATP＋AMP ⇌ 2 ADP の可逆反応を触媒します。これによりアデニンヌクレオチドの恒常性を維持し、細胞のエネルギーチャージを緩衝する役割を担います。ATP/ADP/AMPの相互変換を解糖系や酸化的リン酸化の需要と結びつけることで、AK1は筋収縮、神経活動、ストレス応答など回転の速い状況におけるエネルギーフラックスに影響します。アデニル酸キナーゼ活性の変化は、AMP依存的なシグナル伝達（AMPKと連関する経路やプリン代謝を含む）を調節し得るため、Ak1は代謝適応やレドックスバランスとも関連します。マウス系では、Ak1の改変はエネルギー代謝、ミトコンドリア機能、ならびに心代謝・神経筋機能障害に関連する表現型の研究に有用ですが、臨床的な転帰を示唆するものではありません。

AK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAk1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ak1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ak1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AK1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AK1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ak1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AK1の機能に不可欠なAk1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ak1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ak1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AK1 HDRプラスミド（m）および AK1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAk1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAk1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。