AIP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417914

Übersicht

WWP2 kodiert die E3-Ubiquitin-Protein-Ligase AIP2, eine Ubiquitin-Ligase mit HECT-Domäne, die den Ubiquitin-Transfer katalysiert und dadurch Protein-stabilität und Signalübertragung reguliert. AIP2 ist an der ubiquitinabhängigen Kontrolle zentraler zellulärer Prozesse beteiligt, darunter Proteostase, der Abbau von Rezeptoren und Transkriptionsfaktoren sowie die Feinabstimmung von Signalwegen, etwa im Kontext der TGF-β/SMAD-Signalgebung und verwandter regulatorischer Netzwerke. Über diese Funktionen trägt WWP2 zur Modulation von Zellwachstum, Differenzierung und Programmen der epithelial-mesenchymalen Transition bei. Eine fehlregulierte Ubiquitinierung unter Beteiligung von WWP2 wurde mit veränderten Signalzuständen in mehreren krankheitsrelevanten Modellen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zu Signalweg-Ungleichgewichten unterstützt.

Das AIP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des WWP2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des WWP2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von WWP2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AIP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von WWP2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AIP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf WWP2-Exone abzielen, die für die AIP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere WWP2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AIP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AIP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des WWP2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AIP2 HDR-Plasmid (h) und AIP2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von WWP2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten WWP2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.