AID Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401542-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- AIDO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase AID (h) e o Plasmídeo Double Nickase AID (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para AICDA. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:AID Anticorpo (H-3): sc-518170
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
AID Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401542-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AID Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401542-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AICDA codifica a desaminase de citidina induzida por ativação (AID), uma enzima de edição de DNA que desamina citosina para uracila em DNA de fita simples durante a transcrição. Em células B ativadas, a AID inicia a hipermutação somática e a recombinação de troca de classe dos genes de imunoglobulina ao acoplar a formação de lesões às vias de reparo por excisão de base e de reparo de incompatibilidades, moldando a afinidade e o isotipo dos anticorpos. A atividade desregulada da AID pode introduzir mutações fora do alvo e translocações cromossômicas, vinculando a desregulação de AICDA à instabilidade genômica observada em neoplasias de células B e em outros contextos de sinalização aberrante de dano ao DNA. Como resultado, AICDA é amplamente estudado na imunidade adaptativa, em mecanismos de mutagênese e na escolha de vias de reparo de DNA.
AID O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AICDA em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AICDA. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AICDA. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AICDA interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.