AFP/Alpha fetoprotein Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400355

Visão geral

AFP (alfa-fetoproteína) codifica uma glicoproteína oncofetal secretada, altamente expressa durante o desenvolvimento fetal e em grande parte silenciada após o nascimento, quando contribui para a regulação de programas de crescimento e diferenciação. Em tecidos adultos, a reexpressão de AFP é frequentemente associada a estados alterados da linhagem hepática e à remodelação da matriz extracelular e da sinalização imune no microambiente tumoral. A expressão de AFP é utilizada como característica molecular em estudos de carcinoma hepatocelular e da biologia de tumores de células germinativas, sendo comumente avaliada em conjunto com vias ligadas à diferenciação de hepatócitos, proliferação e respostas ao estresse. Como proteína circulante, a AFP também serve como uma leitura prática para a regulação transcricional e a dinâmica da via secretora em modelos de células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO AFP/Alpha fetoprotein (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene AFP em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do AFP, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do AFP na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína AFP/Alpha fetoprotein.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de AFP para a investigação da sinalização de AFP/Alpha fetoprotein, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) AFP críticos para a função AFP/Alpha fetoprotein
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos AFP para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo AFP/Alpha fetoprotein Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo AFP/Alpha fetoprotein Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus AFP. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo AFP/Alpha fetoprotein Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR AFP/Alpha fetoprotein (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia AFP para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo AFP definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.