AFG3L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404565

概要

AFG3L2は、ミトコンドリア内膜に局在するAAA+型メタロプロテアーゼをコードしており、m-AAAプロテアーゼ複合体を形成します。この複合体は、誤折りたたみタンパク質や未組み立ての膜タンパク質を引き抜いて分解することで、タンパク質品質管理を担います。AFG3L2は調節されたプロテオリシスを介して、呼吸鎖の完全性、ミトコンドリアリボソームの生合成、ならびに酸化的リン酸化能全体の維持に寄与し、その結果として細胞のエネルギー代謝とプロテオスタシスに影響を与えます。AFG3L2機能の破綻はミトコンドリア動態を乱し、バイオエネルゲティクス障害に関連するストレス応答を誘発し得ます。AFG3L2の病的バリアントは、脊髄小脳失調症を含む神経変性表現型と関連しており、神経細胞モデルにおけるミトコンドリア機能障害の研究に有用な標的となります。

AFG3L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAFG3L2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AFG3L2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AFG3L2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AFG3L2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AFG3L2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AFG3L2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AFG3L2の機能に不可欠なAFG3L2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AFG3L2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AFG3L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAFG3L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AFG3L2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AFG3L2 HDRプラスミド（h）および AFG3L2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAFG3L2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAFG3L2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。