AFF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406238

概要

AFF4（AF4/FMR2ファミリー・メンバー4）は核内の転写制御因子をコードし、RNAポリメラーゼIIが生産的な伸長段階へ移行する過程を調整するスーパー・エロンゲーション複合体（SEC）の中核構成要素として機能します。P-TEFbやELLタンパク質などの伸長因子との相互作用を介して、AFF4は刺激応答性遺伝子の迅速な誘導を支えるとともに、クロマチン関連の転写プログラムに影響を与えます。AFF4依存的な転写伸長制御は、細胞の同一性、増殖、ストレス応答経路の調節に寄与します。SEC活性の破綻や、AFF4に関連する転写回路の変化は、腫瘍性の遺伝子発現プログラムや、RNAポリメラーゼIIの異常な伸長によって引き起こされるその他の疾患と関連しています。

AFF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAFF4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AFF4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AFF4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AFF4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AFF4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AFF4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AFF4の機能に不可欠なAFF4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AFF4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AFF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAFF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AFF4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AFF4 HDRプラスミド（h）および AFF4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAFF4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAFF4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。