AdoMetDC Plasmide Double Nickase (h): sc-404514-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AdoMetDC Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AdoMetDC Double Nickase Plasmid (h) e il AdoMetDC Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AMD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AdoMetDC Antibody (E-6): sc-166970
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AdoMetDC Plasmide Double Nickase (h) | sc-404514-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AdoMetDC Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404514-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMD1 codifica la S-adenosilmetionina decarbossilasi umana (AdoMetDC), un enzima limitante nella biosintesi delle poliammine che genera S-adenosilmetionina decarbossilata, utilizzata per la produzione di spermidina e spermina. Attraverso la regolazione dei pool intracellulari di poliammine, AdoMetDC influenza la traduzione, l’organizzazione della cromatina, la replicazione del DNA e la progressione del ciclo cellulare, collegando l’attività di AMD1 al controllo della crescita e alle risposte allo stress cellulare. Un metabolismo delle poliammine deregolato e un’espressione o un’attività alterate di AMD1 sono stati associati a fenotipi proliferativi e alla riprogrammazione metabolica osservati in molteplici contesti patologici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per l’interrogazione delle vie di segnalazione. In quanto “guardiano” metabolico, AMD1 viene comunemente studiato in relazione all’ornitina decarbossilasi e alle vie di catabolismo/trasporto delle poliammine, per mappare i feedback omeostatici e gli effetti a valle sull’espressione genica.
AdoMetDC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AMD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AMD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AMD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AMD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.