Adipsin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401782

概要

補体因子D（CFD、別名アディプシン）はセリンプロテアーゼであり、C3bに結合した因子Bを切断することで補体の代替経路を制御し、C3コンバターゼの形成を促進して補体活性化を増幅します。ヒトではCFDは脂肪組織で高発現しており、自然免疫による監視機構と代謝恒常性を結び付け、炎症の基調やアディポカインシグナル伝達に影響を与えます。CFD活性の変化は、補体によって駆動される炎症の制御異常と関連しており、脂肪組織リモデリング、心代謝形質、免疫介在性の組織障害といった文脈で研究されています。分泌性酵素としてのアディプシンは、補体プロテオリシス、サイトカインネットワーク、細胞ストレス応答のクロストークを解析するうえで、扱いやすい標的（ノード）となります。

Adipsin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCFD遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CFD内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CFDのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Adipsinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Adipsinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CFD欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Adipsinの機能に不可欠なCFDエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CFDゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Adipsin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAdipsin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CFD遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Adipsin HDRプラスミド（h）および Adipsin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCFDホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCFD標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。