ADH5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403859-ACT

O ADH5 humano codifica a álcool desidrogenase 5 (também conhecida como redutase de S-nitrosoglutationa, GSNOR), uma desidrogenase dependente de NAD que controla a desintoxicação celular do formaldeído e a bioatividade do óxido nítrico ao metabolizar a S-nitrosoglutationa. Por meio da regulação da S-nitrosilação de proteínas e do equilíbrio redox, o ADH5 influencia a sinalização de resposta ao estresse, a função mitocondrial e vias ligadas à inflamação e a danos no DNA. Alterações na atividade do ADH5 têm sido associadas a desregulação do estresse nitrosativo e a prejuízo na eliminação de aldeídos, processos implicados na biologia cardiopulmonar, na sinalização imune e na adaptação redox relevante para o câncer. Como resultado, o ADH5 é frequentemente estudado em modelos de lesão oxidativa/nitrosativa, sinalização dirigida pelo metabolismo e estabilidade genômica sob estresse por aldeídos.

ADH5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADH5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADH5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADH5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADH5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADH5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADH5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADH5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADH5 em células tumorais com expressão de ADH5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.