ADHγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402261

概要

ADH1Cは、ヒトのアルコール脱水素酵素ガンマサブユニット（ADHγ）をコードしています。ADHγは亜鉛依存性の細胞質オキシドレダクターゼで、NAD⁺依存的にエタノールおよびその他の短鎖アルコールやアルデヒドを酸化する反応を触媒します。この酵素活性はアルコール代謝やレチノイド代謝を支えるとともに、NADH/NAD⁺バランスやその後段のアルデヒド処理経路に影響することで、細胞のレドックス恒常性とも交差します。ADH1Cに関連する代謝フラックスの変動や調節異常は、アセトアルデヒド負荷や酸化ストレス応答を変化させ得ます。これらの過程は、肝障害、発がん物質代謝、さらに幅広い代謝表現型に関与すると考えられています。ADH遺伝子クラスターの一部として、ADHγは肝臓および上部消化・呼吸器（上部エアロダイジェスティブ・トラクト）の生物学における組織特異的な解毒や異物（ゼノバイオティクス）処理の研究においても重要です。

ADHγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるADH1C遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ADH1C内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ADH1Cのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ADHγタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ADHγシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ADH1C欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ADHγの機能に不可欠なADH1Cエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ADH1Cゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ADHγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびADHγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ADH1C遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ADHγ HDRプラスミド（h）および ADHγ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはADH1Cホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のADH1C標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。