Adducin β Double Nickaseプラスミド (h): sc-402277-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Adducin β Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Adducin βダブルニカースプラスミド（h）およびAdducin βダブルニカースプラスミド（h2）は、ADD2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Adducin β 抗体 (E-11): sc-376063
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Adducin β Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402277-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Adducin β Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402277-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADD2はアドゥシンβ（adducin β）をコードする遺伝子で、細胞膜直下の細胞骨格を構成する膜骨格タンパク質です。アドゥシンβはアドゥシンα/γとヘテロ四量体を形成し、アクチンフィラメントのキャップ化および束化を行うとともに、皮質細胞骨格におけるスペクトリン–アクチンネットワークの組み立てを促進します。アクチンのリモデリングや膜安定性の制御を通じて、アドゥシンβは細胞形状の制御、接着ダイナミクス、機械的ストレスへの耐性に寄与します。これらの過程は、RhoファミリーGTPアーゼのシグナル伝達や、リン酸化依存的なアドゥシン活性の調節によって協調的に制御されることが多いとされています。赤芽球系細胞や機械的負荷を受けやすい他の組織では、アドゥシンの適切な機能が細胞骨格の完全性と膜構造の維持を支えます。アドゥシン複合体における遺伝学的・機能的な異常は、膜の脆弱性や細胞力学特性の変化を伴う疾患との関連で研究されており、赤血球の細胞骨格異常に加え、細胞骨格リモデリングの制御不全が関与するより広い文脈でも検討されています。
Adducin β ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADD2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADD2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADD2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADD2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。