Adducin α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401693

Panoramica

ADD1 codifica l’adducina α, una proteina dello scheletro di membrana che “cappa” i filamenti di actina e promuove l’assemblaggio della rete spettina–actina nella corteccia cellulare. Attraverso la regolazione del rimodellamento del citoscheletro, l’adducina α influenza la forma cellulare, l’adesione e la stabilità della membrana, con effetti a valle su processi quali la migrazione cellulare e la meccanotrasduzione. La funzione dell’adducina è modulata da segnali dipendenti dalla fosforilazione, incluse vie collegate a PKC e PKA che alterano la dinamica di legame all’actina e l’organizzazione corticale. La disregolazione di proteine dell’impalcatura citoscheletrica e di membrana, incluso ADD1, è stata associata ad alterazioni delle proprietà della barriera epiteliale e a fenotipi cellulari rilevanti per la ricerca cardiovascolare e neurobiologica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Adducin α (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Adducin α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADD1 per lo studio della segnalazione di Adducin α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADD1 critici per la funzione di Adducin α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADD1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Adducin α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Adducin α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Adducin α Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Adducin α (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.