ADAM8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407606-ACT

ADAM8 codifica uma metaloprotease-disintegrina ancorada à membrana que medeia o shedding do ectodomínio e interações célula–célula ou célula–matriz, conectando a proteólise à sinalização dependente de adesão. Ao processar receptores de superfície selecionados, citocinas e componentes da matriz extracelular, ADAM8 pode influenciar o tráfego de leucócitos, a sinalização inflamatória e programas de remodelamento que moldam microambientes teciduais. Sua atividade se cruza com vias que governam migração e invasão, incluindo a sinalização relacionada a integrinas e redes de proteases que regulam a renovação da matriz extracelular. A expressão desregulada de ADAM8 tem sido associada a condições inflamatórias e a múltiplos contextos de câncer, tornando-a um nó útil para estudar a comunicação impulsionada por proteases entre compartimentos imunes e estromais.

ADAM8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADAM8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADAM8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADAM8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADAM8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADAM8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADAM8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADAM8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADAM8 em células tumorais com expressão de ADAM8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.